红细胞渗透性实验报告实验报告模板 ．了解各种小分子物质跨膜进入红细胞的速度二、实验原理： 细胞膜具有对物质选择透过的生理功能。脂溶性越高通透性越大，水溶性越高通透性越小；非极性分子比极性容易透过，小 分子比大分子容易透过。水分子可通过由膜脂运动而产生的间隙。 非极性的小分子如O2、CO2、N2 可以很快透过脂双层，不带电荷 的极性小分子，如尿素、甘油等也可以透过人工脂双层，尽管速 度较慢，分子量略大一点的葡萄糖、蔗糖则很难透过，而膜对带 电荷的物质如：H+、Na+、K+、Cl–、HCO3 –是高度不通透的。 2．.hemolysis（溶血现象）：渗入红细胞的溶质能提高红细胞的渗透压，使水进入细胞， 引起细胞吸水胀破；即红细胞膜破裂， 血红蛋白从红细胞中逸出的现象称为溶血现象。3．isotonic solution（等渗溶液）：渗透压与血浆渗透压相等的溶液称为等渗 溶液。 4.Hypertonic solution（高渗溶液）：渗透压高于血浆渗透 压的溶液称为高渗溶液。 5.Hypotonic solution（低渗溶液）：渗 透压低于血浆渗透压的溶液称为低渗溶液。 6.semipermeable（半 透性）：膜或膜状结构只允许溶剂(通常是水)或部分溶质(一般为小 分子物质)透过，而不允许其他溶质(一般为大分子物质)透过的特 7.osmosis（渗透作用）：膜两侧溶液浓度存在差异，造成化学势能差，在势能差的驱动下，溶剂穿过对溶质不透膜的过程。
三、实验材料及作用：150mmol/L NaCl 蒸馏水，5mmol/L NaCl，65 mmol/L NaCl，0.8 mol/L 甲醇，0.8 mol/L 乙醇，0.8 mol/L 丙醇，0.8 mol/L 乙二醇，0.8 mol/L 丙三醇，2%Triton X-100红细胞，氯仿 (三氯甲烷)。 1.NaCl的作用：将正常红细胞悬浮于不同浓度的NaCI 溶液中： 等渗溶液中的红细胞保持正常大小和双凹圆碟形；渗透压递减的 一系列溶液中，红细胞逐步胀大并双侧凸起，当体积增加 30%时 成为球形；体积增加45%～60%则细胞膜损伤而发生溶血，这时血 红蛋白逸出细胞外，仅留下一个双凹圆碟形细胞膜空壳，称为血 影细胞（ghost cell）。正常人的红细胞一般在0.42%NaCI 溶液中时 开始出现溶血，在0.35%NaCI 溶液中时完全溶血. 2.甲醇：小分子、亲脂性的非极性分子甲醇为低渗溶液，容易溶解于脂双层，并迅速透过，提高红细胞的渗透压，促使水分进入 细胞，引起溶血。 3.乙醇：乙醇是脂溶性小分子，可以自由扩散进出细胞。红细胞外有相对高浓度的乙醇，大量乙醇分子顺浓度差进入红细胞，使 红细胞内渗透压高于红细胞外渗透压，水通道开放，大量水分子 进入红细胞，发生溶血。
4.丙醇，丙二醇，丙三醇的作用与甲醇，乙醇的作用相似，都是脂溶性分子，随着分子量的增加，分子的增大，溶血时间增加。 5.去垢剂是一些具有亲水的极性基团和疏水的非极性基团的长链分子。非离子型去垢剂如TritonX-100((聚乙二醇辛基苯基醚))可 与脂双层形成混合微团，它们主要与蛋白质疏水部位相互作用红细胞， 一般不会引起蛋白质变性。而离子型去垢剂与蛋白结合后可改变 白质结构，使之变性，尤其是加热后可使蛋白质解离为单体，如十二烷基磺酸钠（SDS）等。多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂 化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。6.氯仿：氯仿 是很好的脂类萃取剂，不能够发生溶血现象。 四、实验过程： 1.取新鲜羊血，加入适量抗凝剂备用2.观察加入不同溶液之后 的溶血现象。 3.渗透性计时比较 五、实验结果分析： 1.蒸馏水和150mmol/L NaCl： 结论：Na+和Cl-不能以自由扩散方式通过细胞膜，0.15mol/LNaCl 不能导致溶血；而H2O 可以很快地进入细胞内，使细胞膨胀溶血。 结论：150mmol/L NaCl 溶液与羊血细胞是等渗溶液，所以不 能溶血，5 mmol/L NaCl 与65 mmol/L NaCl 溶液为低渗溶液，能够 是红细胞吸水涨裂。
浓度越低，与细胞的渗透压相差越大，渗透 作用越强，越容易发生溶血。 3.相同浓度的甲醇，乙醇，丙醇 结论：血细胞在相同浓度的甲醇，乙醇，丙醇中都能溶血，但是时间不同，随着分子量的增加，分子增大，溶血时间增长，这说 明溶血时间的长短不但与分子的极性有关，还与分子的大小有关。 结论：丙醇，丙二醇，丙三醇都是极性分子，都能使红细胞溶血，但是丙三醇的分子较大，所以溶血时间较长。 5．2%Triton X-100，氯仿 结论：非离子型去垢剂TritonX-100((聚乙二醇辛基苯基醚))可与 脂双层形成混合微团，主要与蛋白质疏水部位相互作用，不会引 起蛋白质变性，从而是红细胞内物质渗出，发生溶血现象。而氯 仿根本无法溶解红细胞。 六、讨论 1.试分析水进入红细胞膜的速度是由于扩散吗?如果不是,，如何 证明? 答：不是。因为水进入红细胞的速度很快，而渗透作用不能这么快。红细胞膜上存在水通道，控制水的进出。 证明方法：可以用同位素标记的方法，将水通道蛋白标记，如果发现其中有水通过，说明水不是仅仅通过渗透作用进入细胞的。 答：因为去垢剂是一些具有亲水的极性基团和疏水的非极性基团的长链分子。非离子型去垢剂如TritonX-100((聚乙二醇辛基苯基 醚))可与脂双层形成混合微团，它们主要与蛋白质疏水部位相互作 用，一般不会引起蛋白质变性。
而离子型去垢剂与蛋白结合后可 改变蛋白质结构，使之变性，尤其是加热后可使蛋白质解离为单 体，如十二烷基磺酸钠（SDS）等。多种去污剂可以溶解细胞膜上 的磷脂化合物，从而使细胞膜破裂，释放出细胞内物质。3.实验 结果并分析不同类型的醇透过细胞膜的速度不同的原因（按极性、 分子大小等分析）。七、参考文献 实验三细胞膜的渗透性实验 学号：200900140157姓名：俞华军 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够 提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于 溶质渗入速度不相同，因此溶血时间也不相同。因此，溶血现象 可以可用于粗略判定物质穿膜的速度快慢和时间。 影响物质穿膜能力大小的因素主要有三个：一是物质脂溶性的大小，因为膜骨架是有脂双层分子构成的，所以脂溶性物质易于 穿过细胞膜；二是分子体积大小，较小的分子易穿过细胞膜；三 是物质带电状况，因为细胞表面一般带电，不带电的物质易进入 细胞。 判定细胞溶血不溶血的方法：溶血的溶液红的程度更高，且溶液发亮，透明度也更高。二是可以在显微镜下观察细胞的形态。 细胞破裂后细胞形态并没有发生很大的变化，而是膜结构上有一 个小口，膜还是有结构的，只不过体积变小了。
需要说明的等渗溶液中细胞也会是破裂的，因为生活状态下膜两侧不断交换物质，代谢产物的积累使细胞渗透压的平衡破坏， 同时有些代谢物质对细胞是有毒性的，所以长时间放置会使细胞 破裂，所以做等渗实验时间不宜超过1h。 试剂：鸡血，0.85%氯化钠溶液，0.0085%氯化钠溶液，0.8mol/L甲醇，0.8mol/L 丙三醇，6%葡萄糖溶液，2%TritonX-100 2-3ml，加0.85%氯化钠溶液 4ml，在1000r/min 件下离心5min（RBC压积量应不少于0.3ml，否则应补加鸡血） 将上述离心的红细胞按沉淀量配成50%浓度，总体积量应不少于0.6ml 每组取6支试管分别加入如下溶液各3ml （3）0.8mol/L甲醇 （6）2%TritonX-100 4、向上述6试管中分别加入50%红细胞悬液1 滴，用吸管吸打 均匀。观察各管是否有溶血现象发生（观察时间一小时）。记录溶 血时间并于显微镜下观察各溶液中细胞。 图一肉眼观察六种溶液中鸡红细胞溶血状况 号试管为：3ml0.85%氯化钠溶液+1滴稀释鸡血不溶血 号试管为：3ml0.0085%氯化钠溶液+1滴稀释鸡血 溶血 号试管为：3ml0.8mol/L甲醇+1 滴稀释鸡血溶血 号试管为：3ml0.8mol/L丙三醇+1 滴稀释鸡血 号试管为：3ml2%TritonX-100+1 滴稀释鸡血溶血 号试管中的细胞局部放大图（圈内的细胞发生溶血） 离心机使用时,要将配平后的离心管对称放置在离心机内,禁止未配平就放入离心机和非对称放置离心管。
试管中有红细胞和测试溶液时,不应强力摇晃,以免造成人为的红细胞破裂。 3.对于溶血较快的试管，用显微镜观察时要注意滴加血液后立即镜检，否则将会因为细胞溶血太快而看不到细胞。 4.即使细胞在等渗溶液中短时间内未发生溶血现象，但是细胞长时间处于等渗溶液中也会发生溶血现象。 5.发生溶血的细胞从形态上看，膜结构上有一个个口，膜还是有结构的，但是细胞比正常细胞小。 姓名：学号：201000232--- 学院：生命科学学院 班级：临 七四班 实验名称：细胞膜的渗透性实验 实验目的：了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。实验原理：将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶 透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，深入的溶质可以提高红细胞的渗透压，所以促进水分进入细胞，引起细胞 溶血。由于溶质渗入的速度互补相同，因此溶血时间也不相同。 实验材料：鸡血，0.85%的氯化钠溶液，0.0085%的氯化钠溶液， 0.8mol/L的甲醇，0.8mol/L 的丙三醇，6%的葡萄糖溶液，2%的 Triton X—100 溶液，试管六支，离心机，滴管等 实验步骤：1、取鸡血2-3ml 加入0.85%的氯化钠溶液4ml，在 1000r/min条件下离心5 分钟，（RBC 压积量不少于0.3ml，否则 应补加鸡血） 0.8mol/L的甲醇 2%的TritonX—100 溶液 小时），记录溶血时间并于显微镜下观察 各种溶液中的细胞。 0.85%的氯化钠溶液0.0085%的氯化钠溶液 0.85mol\L的甲醇 0.85mol\L 6%的葡萄糖溶液2% Triton X—100 溶液 反思与交流：
